Protocolos (Abril 2020)

El uso del laberinto elevado más como un ensayo del comportamiento relacionado con la ansiedad en roedores

El uso del laberinto elevado más como un ensayo del comportamiento relacionado con la ansiedad en roedores

Resumen El elevado laberinto plus es un ensayo de comportamiento ampliamente utilizado para roedores y se ha validado para evaluar los efectos contra la ansiedad de los agentes farmacológicos y las hormonas esteroides, y para definir las regiones cerebrales y los mecanismos subyacentes al comportamiento relacionado con la ansiedad.

Generación de una población definida y uniforme de progenitores y neuronas del SNC a partir de células madre embrionarias de ratón.

Generación de una población definida y uniforme de progenitores y neuronas del SNC a partir de células madre embrionarias de ratón.

Resumen Se describe un protocolo detallado que permite la generación de poblaciones esencialmente puras de neuronas glutamatérgicas a partir de células madre embrionarias de ratón (ES). Se basa en el cultivo de células ES que se mantienen indiferenciadas por la división repetida y posteriormente se amplifican como agregados celulares no adherentes. El t

Corrigendum: un protocolo estandarizado para el estrés de derrota social repetido en ratones

Corrigendum: un protocolo estandarizado para el estrés de derrota social repetido en ratones

El artículo original fue publicado el 21 de julio de 2011. Nat. Protocol. 6 , 1183-1191 (2011); doi: 10.1038 / nprot.2011.361; publicado en línea el 21 de julio de 2011; corregido después de imprimir 17 de diciembre de 2014 En la versión de este artículo publicada inicialmente, había cierta confusión sobre la interpretación de la oración "Además, las derrotas deben realizarse bajo evaluación veterinaria constante y con la aprobación completa de todas las juntas y estándares de revisión institucional necesarios". Para mayor c

Ensayo de citoma micronúcleo en bloque de citocinesis

Ensayo de citoma micronúcleo en bloque de citocinesis

Este artículo ha sido actualizado Resumen El ensayo de citometría de micronúcleos en bloque de citocinesis es un sistema integral para medir el daño del ADN, la citostasis y la citotoxicidad. Los eventos de daño en el ADN se puntúan específicamente en células binucleadas (BN) una vez divididas e incluyen (a) micronúcleos (MNi), un biomarcador de rotura de cromosomas y / o pérdida de cromosomas completos, (b) puentes nucleoplásmicos (NPB), un biomarcador de ADN reparaciones incorrectas y / o fusiones finales de telómeros, y (c) brotes nucleares (NBUD), un biomarcador de eliminación de ADN amplif

Incorporación específica de sitio de fluorotirosinas en la subunidad R2 de ribonucleótido reductasa de E. coli por ligadura de proteína expresada

Incorporación específica de sitio de fluorotirosinas en la subunidad R2 de ribonucleótido reductasa de E. coli por ligadura de proteína expresada

Resumen La ligadura de proteína expresada (EPL) permite la semisíntesis de una proteína diana con la incorporación específica del sitio de sondas o aminoácidos no naturales en sus extremos N o C. Aquí, describimos el protocolo que nuestro laboratorio ha desarrollado para incorporar fluorotirosinas (F n Ys) en el residuo 356 de la pequeña subunidad de ribonucleótido reductasa de Escherichia coli usando EPL. En este

Corrección de errores: análisis del número de copias en todo el genoma de células individuales

Corrección de errores: análisis del número de copias en todo el genoma de células individuales

El artículo original fue publicado el 03 de mayo de 2012 Nat. Protocol. 7 , 1024-1041 (2012); publicado en línea el 3 de mayo de 2012; corregido después de imprimir 24 de febrero de 2016 En la versión de este artículo publicada inicialmente, las unidades para la concentración de NaCl en el tampón NST descrito en la sección Configuración de reactivos eran incorrectas. La unid

Un ensayo de micronúcleos in vivo de alto rendimiento para la detección de inestabilidad genómica en ratones

Un ensayo de micronúcleos in vivo de alto rendimiento para la detección de inestabilidad genómica en ratones

Asignaturas Daño y reparación de ADN Citometría de flujo Inestabilidad genómica Ratón Resumen Describimos un método sensible, robusto y de alto rendimiento para cuantificar la formación de micronúcleos, marcadores de inestabilidad genómica, en eritrocitos de ratón. Los micronúcleos son cromosomas completos o segmentos cromosómicos que se han separado del núcleo. Otros métod

Cribado de actividad del sustrato (SAS): un procedimiento general para la preparación y cribado de una biblioteca de sustrato de proteasa no peptídica basada en fragmentos para el descubrimiento de inhibidores

Cribado de actividad del sustrato (SAS): un procedimiento general para la preparación y cribado de una biblioteca de sustrato de proteasa no peptídica basada en fragmentos para el descubrimiento de inhibidores

Resumen La detección de actividad de sustrato (SAS) es un método basado en fragmentos para el rápido desarrollo de sustratos nuevos y su conversión en inhibidores no peptídicos de proteasas Cys y Ser. El método consta de tres pasos: (i) se analiza una biblioteca de N- acil aminocoumarinas con diversos grupos N- acilo de bajo peso molecular para identificar sustratos de proteasa usando un ensayo simple basado en fluorescencia; (ii) los sustratos de N- acil aminocoumarina identificados se optimizan mediante una rápida síntesis y evaluación análogas; y (iii) los sustratos optimizados se convierten

Cultivo primario de células de cromafina bovina

Cultivo primario de células de cromafina bovina

Resumen Este protocolo describe el cultivo primario de células de cromafina individuales derivadas por digestión enzimática de la médula suprarrenal de la glándula suprarrenal bovina. Desde finales de la década de 1970, estas células han proporcionado un sistema modelo útil para estudiar la biosíntesis, almacenamiento y liberación de neurotransmisores en el sistema catecolaminérgico. El protoc

Ensayos basados ​​en biosensores para PQS, HHQ y moléculas de señal de detección de quórum de quórum de 2-alquil-4-quinolona relacionadas

Ensayos basados ​​en biosensores para PQS, HHQ y moléculas de señal de detección de quórum de quórum de 2-alquil-4-quinolona relacionadas

Resumen Las 2-alquil-4-quinolonas (AHQ) como la 2-heptil-3-hidroxi-4-quinolona (PQS) y la 2-heptil-4-quinolona (HHQ) son moléculas señalizadoras del quórum. Aquí, describimos métodos para la detección AHQ, identificación tentativa y cuantificación, que emplean una cepa biosensora AHQ Pseudomonas aeruginosa basada en lux . El pro

Análisis cuantitativo de ensayos de captura de conformación cromosómica (3C-qPCR)

Análisis cuantitativo de ensayos de captura de conformación cromosómica (3C-qPCR)

Resumen La tecnología de captura de conformación cromosómica (3C) es una metodología pionera que permite explorar la organización genómica in vivo a una escala que abarca desde unas pocas decenas hasta unos cientos de pares de kilobases. Comprender el plegamiento del genoma a esta escala es particularmente importante en mamíferos donde los elementos reguladores dispersos, como los potenciadores o aislantes, están involucrados en la regulación génica. La tecno

Generación de extractos libres de células de óvulos de Xenopus y cromatina de esperma desmembranada para el ensamblaje y el aislamiento de núcleos formados in vitro para microscopía electrónica de barrido (SEM)

Generación de extractos libres de células de óvulos de Xenopus y cromatina de esperma desmembranada para el ensamblaje y el aislamiento de núcleos formados in vitro para microscopía electrónica de barrido (SEM)

Resumen Este protocolo detalla los métodos para la generación de extractos libres de células y plantillas de ADN a partir de los óvulos y la cromatina espermática, respectivamente, del sapo con garras Xenopus laevis . Hemos utilizado este sistema con microscopía electrónica de barrido (SEM), como se detalla aquí, para analizar los requisitos bioquímicos y las vías estructurales para la biogénesis de las envolturas nucleares eucariotas (NE) y los complejos de poros nucleares (APN). Este prot

Obtención de genomas de microorganismos ambientales no cultivados utilizando genómica unicelular basada en FACS

Obtención de genomas de microorganismos ambientales no cultivados utilizando genómica unicelular basada en FACS

Asignaturas Microbiología ambiental Citometría de flujo Genómica Amplificación del genoma completo Resumen La genómica unicelular es una herramienta poderosa para explorar la composición genética de los microorganismos ambientales, la gran mayoría de los cuales son difíciles, si no imposibles, de cultivar con los enfoques actuales. Aquí pr

Artritis inducida por colágeno

Artritis inducida por colágeno

Resumen El modelo de ratón de artritis inducida por colágeno (CIA) es el modelo autoinmune de artritis reumatoide más estudiado. La artritis autoinmune se induce en este modelo por inmunización con una emulsión de adyuvante completo de Freund y colágeno tipo II (CII). Este protocolo describe los pasos necesarios para la adquisición, el manejo y la preparación de CII, así como la selección de cepas de ratones, la técnica de inmunización adecuada y la evaluación de la incidencia y gravedad de la artritis. Por lo gene

Generación de organoides cerebrales a partir de células madre pluripotentes humanas.

Generación de organoides cerebrales a partir de células madre pluripotentes humanas.

Asignaturas Desarrollo del sistema nervioso. Neurogénesis Modelos neurológicos Diferenciación de células madre Resumen El desarrollo del cerebro humano exhibe varios aspectos únicos, como una mayor complejidad y expansión de la producción neuronal, que han resultado difíciles de estudiar en organismos modelo. Como r

Errata: análisis de partículas atadas de ADN circular superenrollado utilizando mangos de ácido nucleico peptídico

Errata: análisis de partículas atadas de ADN circular superenrollado utilizando mangos de ácido nucleico peptídico

El artículo original fue publicado el 21 de agosto de 2014. Nat. Protocol. 9 , 2206–2223 (2014); doi: 10.1038 / nprot.2014.152; publicado en línea el 21 de agosto de 2014; corregido después de imprimir 12 de septiembre de 2014 En la versión de este artículo publicada inicialmente, la fuente de la cual se adaptaron las Figuras 2, 4, 8 y 9 no fue citada y acreditada correctamente. El er

Análisis exhaustivo de fagocitos mononucleares retinianos de ratón

Análisis exhaustivo de fagocitos mononucleares retinianos de ratón

Asignaturas Neuroinmunología Retina Resumen El sistema inmune innato se activa en una serie de trastornos de la retina inflamatorios y degenerativos, como la degeneración macular relacionada con la edad (DMAE). La microglia retiniana, los macrófagos coroideos y los monocitos reclutados, denominados colectivamente "fagocitos mononucleares retinianos", son determinantes críticos del resultado de la enfermedad ocular. Mu

Desarrollo, validación e implementación de afinidad por metal inmovilizado para ensayos de cribado de alto rendimiento basados ​​en fosfoquímicos (IMAP) para bibliotecas de compuestos de bajo peso molecular

Desarrollo, validación e implementación de afinidad por metal inmovilizado para ensayos de cribado de alto rendimiento basados ​​en fosfoquímicos (IMAP) para bibliotecas de compuestos de bajo peso molecular

Resumen Este protocolo describe el desarrollo del ensayo, la validación y la implementación de afinidad metálica inmovilizada automatizada para la polarización de fluorescencia (FP) basada en fosfoquímicos (IMAP) y los ensayos de detección de alto rendimiento (HTS) de transferencia de energía de resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET) para la identificación de inhibidores de quinasa de bajo peso molecular. Ambos

Corrigendum: nanocatalizadores a base de cobalto para procesos de oxidación verde e hidrogenación

Corrigendum: nanocatalizadores a base de cobalto para procesos de oxidación verde e hidrogenación

El artículo original fue publicado el 21 de mayo de 2015. Nat. Protocol. 10 , 916–926 (2015); publicado en línea el 21 de mayo de 2015; corregido después de imprimir 16 de septiembre de 2015 En la versión de este artículo publicada inicialmente, el cuadro 1 tenía el título incorrecto; el título correcto es "Experimentos de reciclaje de catalizadores con nitrobenceno: 30 h". El error